文章摘要: PCR實驗室也稱為基因擴增實驗室。它利用分子生物學(xué)技術(shù)對核酸片段進行擴增,也可視為一種特殊的核酸體外復(fù)制。利用基因追蹤系統(tǒng)掌握人體內(nèi)含量,檢測精度可達納米級?,F(xiàn)在PCR技術(shù)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于傳染病、腫瘤靶向、生殖遺傳學(xué)等領(lǐng)域,但由于該技術(shù)對待測核酸進
PCR實驗室也稱為基因擴增實驗室。它利用分子生物學(xué)技術(shù)對核酸片段進行擴增,也可視為一種特殊的核酸體外復(fù)制。利用基因追蹤系統(tǒng)掌握人體內(nèi)含量,檢測精度可達納米級?,F(xiàn)在PCR技術(shù)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于傳染病、腫瘤靶向、生殖遺傳學(xué)等領(lǐng)域,但由于該技術(shù)對待測核酸進行了多次大量的檢測,即使是少量的污染也很容易造成假陽性結(jié)果。其次,PCR實驗室要求比較高,實驗過程復(fù)雜。如果中間環(huán)節(jié)有疏漏,可能會造成假陰性結(jié)果。
PCR實驗過程當(dāng)中容易發(fā)生污染。造成污染的主要原因有四個:
1、PCR產(chǎn)物的污染。這也是PCR實驗室普遍的污染原因。PCR產(chǎn)物重復(fù)擴增后,復(fù)制量遠遠高于PCR的檢測限,因此即使是少量的污染也足以造成假陽性實驗結(jié)果。
2、試劑污染。在制備試劑過程當(dāng)中,試劑因接觸受污染的容器、移液管、移液器吸頭、溶液等而受到污染。
3、待測樣品被污染。放置樣品的容器被污染或由于容器密封不嚴造成樣品與外界接觸被污染;其次,在核酸提取過程當(dāng)中使用了被污染的移液器或移液器吸頭,造成PCR實驗室被污染;另外,有些樣品含有雜質(zhì),如果散布在空氣中,可能會形成交叉污染。
4、氣溶膠污染。如果氣溶膠中含有病毒和其他污染物擴散到空氣中,則很可能會污染PCR實驗室。氣溶膠是由空氣和液體表層之間的摩擦產(chǎn)生的。打開蓋子、搖晃反應(yīng)管、反復(fù)吸入污染進樣器的樣品會形成氣溶膠并引起交叉污染。據(jù)計算,一個氣溶膠粒子可以包含48,000個副本。因此,應(yīng)特別注意氣溶膠造成的污染問題。
只要PCR實驗室受到污染,之前的結(jié)果報告就會失效,其他的實驗操作就無法進行。因此需要找到污染源并徹底清除,才能獲得準確有效的實驗結(jié)果。
PCR實驗室出現(xiàn)污染的原因是什么
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