F 的鈣熒光探針
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F 的鈣熒光探針
Fluo-4, AMCAS#：273221-67-3中文名：鈣熒光探針 Fluo-4, AM分子式：C51H50F2N2O23分子量：1096.94性質(zhì)：1. 外觀：橙紅色粉末2. 純度：≥90%（HPLC）3. 產(chǎn)品描述： Fluo-4 是一種將 Fluo-3 結(jié)構(gòu)中的 Cl 替換成 F 的鈣熒光探針。由于將 Cl 替換成了電子吸引力更強(qiáng)的 F，它的大激發(fā)波長(zhǎng)會(huì)向短波長(zhǎng)處偏離 10 nm 左右。這個(gè)波長(zhǎng)更接近于氬激光器的波長(zhǎng)，所以用氬激光器激發(fā)時(shí)，F(xiàn)luo-4 的熒光強(qiáng)度比 Fluo-3 強(qiáng)一倍。Fluo-4, AM 穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞后被細(xì)胞內(nèi)的酯酶剪切形成 Fluo-4，從而被滯留在細(xì)胞內(nèi)，F(xiàn)luo-4 若以游離配體形式存在時(shí)幾乎是非熒光性的，但是當(dāng)它與細(xì)胞內(nèi)鈣離子結(jié)合后可以產(chǎn)生較強(qiáng)的熒光，大激發(fā)波長(zhǎng)為 494nm，大發(fā)射波長(zhǎng)為 516nm。可以使用激光共聚焦顯微鏡或流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的變化。4. 操作說(shuō)明（for Human T cells）*（1） 試劑
2 mM 的 Fluo-4, AM/DMSO（將 1mg Fluo-4, AM 溶于 442μL DMSO） Pluronic F127
Hanks?balanced salt solution（HBSS）HEPES buffer saline（10mM HEPES，1mM Na2HPO4，137mM NaCl，5mM KCl，1mM CaCl2， 0.5mM MgCl2，5mM glucose，0.1% BSA，pH 7.4）(2） 操作①. 向Fluo-4, AM/DMSO 溶液中加入16.5mg Pluronic F127，Pluronic F127 可以 防止Fluo-4, AM 在 HBSS 中聚合并能幫助其進(jìn)入細(xì)胞。②. 用 HBSS 稀釋 Fluo-4, AM 溶液，制備 4μM 的 Fluo-4, AM 工作液。 ③. 將 Fluo-4, AM 工作液加入細(xì)胞，在 37℃培養(yǎng) 20 分鐘。④. 加入 5 倍體積的含有 1%胎牛血清的 HBSS，再繼續(xù)培養(yǎng) 40 分鐘。⑤. 用HEPES buffer saline 洗滌細(xì)胞3 次，然后用HEPES buffer saline 使細(xì)胞重懸浮，制成1×105cells/mL 的溶液。⑥. 37℃下培養(yǎng) 10 分鐘，然后用該細(xì)胞進(jìn)行熒光鈣離子檢測(cè)。激發(fā)波長(zhǎng) 494nm，發(fā)射波長(zhǎng)
516nm。
*標(biāo)記的條件因細(xì)胞種類而異，在每次實(shí)驗(yàn)前，請(qǐng)先確定佳條件。以上方法僅供參考。 儲(chǔ)存條件：-20℃干燥避光保存，有效期一年。
2）確認(rèn)收貨前請(qǐng)仔細(xì)核驗(yàn)產(chǎn)品質(zhì)量，避免出現(xiàn)以次充好的情況。
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